«Identification of Reference Genes for Quantitative RT-PCR in Ascending Aortic Aneurysms»

Dominic Henn, Doris Bandner-Risch, Hilja Perttunen, Wolfram Schmied, Carlos Porras, Francisco Ceballos, Noela Rodriguez-Losada, Hans-Joachim Schäfers

PLoS One. 2013;8(1):e54132. doi: 10.1371/journal.pone.0054132. Epub 2013 Jan 11.

La hipertensión y las malformaciones congénitas de la válvula aórtica se asocian con frecuencia a los aneurismas de aorta. Los mecanismos moleculares de la formación de aneurismas en estas circunstancias no se conocen con profundidad. No se conocen “genes de referencia” para estudios de actividad génica en tejido aórtico que no estén influenciados por la morfología de la válvula aórtica y sus consecuencias hemodinámicas, por la dilatación aórtica, la hipertensión o la medicación antihipertensiva. Este estudio determina los genes presentes en el tejido de la aorta ascendente que son independientes de esos parámetros.

Se recogieron muestras de tejido de aortas dilatadas y no dilatadas pertenecientes a 60 pacientes de menos de 70 años y con distintas morfologías de la válvula aórtica (tricúspide no dilatada n = 24, dilatada n = 11; bicúspide no dilatada n = 6, dilatada n = 15; unicúspide dilatada n = 4). De los individuos estudiados 36 eran hipertensos, y 31 tomaban fármacos del grupo de los IECAS o antagonistas de los receptores de la AT1. Las muestras se obtuvieron de la pared de la aorta ascendente en quirófano. Analizamos el nivel de expresión de 32 genes candidatos a ser “genes de referencia” mediante RT-PCR cuantitativa (RT-qPCR). Los diferentes niveles de expresión se analizaron con estadística paramétrica. El análisis de la expresión de estos 32 genes mediante RT-qPCR mostró que los genes EIF2B1, ELF1 y PPIA permanecían constantes en sus niveles de actividad en los distintos grupos estudiados, siendo por tanto insensibles a la morfología de la válvula aórtica, a la dilatación aórtica, la hipertensión o la medicación con IECAs o antagonistas de los receptores de la AT1. Al contrario de otros muchos “genes de referencia” habitualmente empleados, los genes EIF2B1, ELF1 y PPIA no están influenciados por las enfermedades de la aorta o de la válvula aórtica ni por la hipertensión o su tratamiento y por lo tanto son los más apropiados para realizar estudios de expresión génica en el tejido de la aorta ascendente.

«Identification of Reference Genes for Quantitative RT-PCR in Ascending Aortic Aneurysms»

Dominic Henn, Doris Bandner-Risch, Hilja Perttunen, Wolfram Schmied, Carlos Porras, Francisco Ceballos, Noela Rodriguez-Losada, Hans-Joachim Schäfers

PLoS One. 2013;8(1):e54132. doi: 10.1371/journal.pone.0054132. Epub 2013 Jan 11.

Hypertension and congenital aortic valve malformations are frequent causes of ascending aortic aneurysms. The molecular mechanisms of aneurysm formation under these circumstances are not well understood. Reference genes for gene activity studies in aortic tissue that are not influenced by aortic valve morphology and its hemodynamic consequences, aortic dilatation, hypertension, or antihypertensive medication are not available so far. This study determines genes in ascending aortic tissue that are independent of these parameters.

Tissue specimens from dilated and undilated ascending aortas were obtained from 60 patients (age ≤70 years) with different morphologies of the aortic valve (tricuspid undilated n = 24, dilated n = 11; bicuspid undilated n = 6, dilated n = 15; unicuspid dilated n = 4). Of the studied individuals, 36 had hypertension, and 31 received ACE inhibitors or AT1 receptor antagonists. The specimens were obtained intraoperatively from the wall of the ascending aorta. We analyzed the expression levels of 32 candidate reference genes by quantitative RT-PCR (RT-qPCR). Differential expression levels were assessed by parametric statistics. The expression analysis of these 32 genes by RT-qPCR showed that EIF2B1, ELF1, and PPIA remained constant in their expression levels in the different specimen groups, thus being insensitive to aortic valve morphology, aortic dilatation, hypertension, and medication with ACE inhibitors or AT1 receptor antagonists. Unlike many other commonly used reference genes, the genes EIF2B1, ELF1, and PPIA are neither confounded by aortic comorbidities nor by antihypertensive medication and therefore are most suitable for gene expression analysis of ascending aortic tissue.